Recombinant Mouse CXCL13/BCA-1 Protein,hFc Tag 浦斯瑞（上海）生物醫(yī)藥供應(yīng)

CUT&RUN和ChIC是兩種用于研究蛋白質(zhì)-DNA相互作用的技術(shù)，它們有一些關(guān)鍵的區(qū)別：1.**技術(shù)原理**：-**ChIC（ChromatinImmunocleavage）**：ChIC技術(shù)利用抗體將感興趣的蛋白與ProteinA-MNase相結(jié)合來進(jìn)行DNA切割。ChIC的優(yōu)勢在于使用TF特異性抗體系住MNase，并只在結(jié)合位點(diǎn)裂解。-**CUT&RUN（CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease）**：CUT&RUN技術(shù)則是在核的輕微MNase處理后釋放單核小體和TF-DNA復(fù)合物，留下寡核小體。CUT&RUN通過在冰上進(jìn)行簡短的消化反應(yīng)，在TF結(jié)合的MNase擴(kuò)散到周邊的基因組和裂解可接近的染色質(zhì)之前在上清中恢復(fù)TF-DNA復(fù)合物。2.**操作步驟和簡便性**：-**ChIC**：ChIC可能需要甲醛固定操作，這可能重新引入了ChIP-seq的一些問題，如交聯(lián)導(dǎo)致的DNA和蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾。-**CUT&RUN**：CUT&RUN簡化了操作步驟，使用磁珠固定細(xì)胞核，適用于新鮮和冷凍組織樣本，縮短了生成DNA測序文庫的時(shí)間（1-2天）。3.**背景信號(hào)和信噪比**：-**ChIC**：ChIC產(chǎn)生的背景信號(hào)可能較高，因?yàn)樗赡苌婕暗椒翘禺愋缘腄NA切割。

BsuDNAPolymerase（嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶）在PCR中的應(yīng)用具有多個(gè)優(yōu)勢，以下是一些關(guān)鍵點(diǎn)：1.**鏈置換活性**：BsuDNAPolymerase具有很強(qiáng)的鏈置換活性，這使得它非常適合于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，如重組酶聚合酶擴(kuò)增（RPA）。在這些技術(shù)中，BsuDNAPolymerase可以快速、高效、特異性地?cái)U(kuò)增模板，在10到30分鐘內(nèi)將痕量的核酸模板（低至單拷貝）擴(kuò)增至可以檢出的水平。2.**高溫穩(wěn)定性**：BsuDNAPolymerase在高溫下保持活性，這使得它在一些需要高溫反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)條件下表現(xiàn)出色。3.**高靈敏度和特異性**：BsuDNAPolymerase在等溫?cái)U(kuò)增中展現(xiàn)出高靈敏度，能夠?qū)⑽⒘亢怂崮０鍞U(kuò)增到可檢測水平。同時(shí)，它也具有高特異性，減少了非特異性擴(kuò)增的風(fēng)險(xiǎn)。4.**簡化的樣品處理**：BsuDNAPolymerase可以直接對(duì)復(fù)雜樣品進(jìn)行擴(kuò)增，無需事先進(jìn)行復(fù)雜的核酸純化和提取步驟，節(jié)省了時(shí)間和成本。5.**可擴(kuò)增DNA和RNA**：BsuDNAPolymerase不僅可以擴(kuò)增DNA，還可以直接擴(kuò)增RNA，省去了額外的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（cDNA合成）步驟，這對(duì)于RNA的檢測和分析更加方便快捷。6.**無核酸外切酶和RNase殘留**：BsuDNAPolymerase在生產(chǎn)過程中確保無核酸外切酶、切口酶及RNase殘留，這有助于提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。Recombinant Human PILRA Protein,His TagCas12a同源物能夠識(shí)別更簡單的PAM序列（如5-TTN），這使得基因組的覆蓋率顯著提高。

磁珠法在基因克隆中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：1.**質(zhì)粒DNA的提取**：磁珠法可以用于從細(xì)菌細(xì)胞中提取質(zhì)粒DNA，這對(duì)于質(zhì)粒的克隆和表達(dá)至關(guān)重要。通過磁珠法提取的質(zhì)粒DNA純度高，適合用于后續(xù)的酶切、連接、轉(zhuǎn)化等分子克隆步驟。2.**基因組DNA的提取**：磁珠法可以用于從各種生物樣本中提取基因組DNA，這對(duì)于基因組的克隆和分析非常重要。提取的基因組DNA可以用于PCR擴(kuò)增、基因表達(dá)分析、基因突變檢測等。3.**mRNA的提取和純化**：在mRNA克隆中，磁珠法可以用于提取和純化mRNA，這對(duì)于cDNA的合成和基因表達(dá)分析非常關(guān)鍵。磁珠法提取的mRNA純度高，可以用于后續(xù)的cDNA合成和RT-PCR等實(shí)驗(yàn)。4.**PCR產(chǎn)物的純化**：磁珠法可以用于純化PCR產(chǎn)物，去除反應(yīng)中的酶、dNTPs和其他雜質(zhì)，為克隆PCR產(chǎn)物提供高純度的DNA模板。5.**DNA片段的篩選和回收**：在基因克隆過程中，可能需要從多個(gè)DNA片段中篩選出特定大小或序列的片段。磁珠法可以用于DNA片段的篩選和回收，提高克隆效率。6.**自動(dòng)化和高通量操作**：磁珠法易于與自動(dòng)化設(shè)備結(jié)合，適合高通量樣本處理，這對(duì)于大規(guī)?；蚩寺№?xiàng)目尤為重要。自動(dòng)化操作減少了人為操作誤差，提高了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和可靠性。

T7EndonucleaseI(T7EI)在CRISPR/Cas9基因編輯中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在突變體檢測和基因編輯效率評(píng)估上。以下是T7EI在CRISPR/Cas9中的具體應(yīng)用步驟和特點(diǎn)：1.**基因編輯效率評(píng)估**：-T7EI用于評(píng)估CRISPR-Cas9在給定的導(dǎo)向RNA靶位點(diǎn)上對(duì)細(xì)胞群體進(jìn)行基因編輯的效率。-通過PCR擴(kuò)增圍繞CRISPR導(dǎo)向RNA靶位點(diǎn)的基因組DNA，如果CRISPR-Cas9介導(dǎo)的非同源末端連接（NHEJ）修復(fù)事件引入了突變，變性和退火將形成突變型和野生型PCR擴(kuò)增子的異源雙鏈DNA。2.**突變體檢測**：-如果CRISPR/Cas9編輯成功在DNA上引入突變，則可與野生型DNA片段退火產(chǎn)生異質(zhì)雙鏈DNA。T7EI可以識(shí)別該DNA上的不完全配對(duì)的DNA位點(diǎn)然后進(jìn)行雙鏈切割，通過瓊脂糖凝膠電泳即可顯示酶切后的條帶，從而半定量判定基因編輯效果。-T7EI能識(shí)別長度大于或等于2bp的插入、缺失或突變導(dǎo)致的錯(cuò)配DNA，不能識(shí)別1bp的插入、缺失或突變。3.**實(shí)驗(yàn)步驟**：-收集細(xì)胞并提取基因組DNA，然后使用PCR擴(kuò)增期望編輯的基因組區(qū)域。擴(kuò)增子的長度建議為0.5-1kb。-對(duì)擴(kuò)增的DNA進(jìn)行變性和退火復(fù)性，以產(chǎn)生異質(zhì)雙鏈DNA。-使用T7EI酶處理退火后的DNA產(chǎn)物，在37℃孵育15分鐘。

T5核酸外切酶（T5Exonuclease）具有以下特點(diǎn)和技術(shù)應(yīng)用：1.**降解方向**：T5核酸外切酶按照5'→3'方向降解雙鏈或單鏈DNA。2.**起始消化位置**：T5核酸外切酶既能從單鏈或雙鏈DNA的5'末端起始消化，也可以從線性或環(huán)狀雙鏈DNA的缺口(gap)或缺刻(nick)處起始消化。3.**對(duì)超螺旋雙鏈DNA的作用**：T5核酸外切酶無法降解超螺旋雙鏈DNA。4.**單鏈DNA核酸內(nèi)切酶活性**：T5核酸外切酶還具有單鏈DNA核酸內(nèi)切酶活性。5.**應(yīng)用領(lǐng)域**：-用于Gibson組裝，這是一種在恒溫條件下有效連接帶有多個(gè)重疊序列片段的技術(shù)。-從完全連接的環(huán)狀雙鏈DNA中去除不完全連接產(chǎn)物。-降解堿裂解質(zhì)粒提取方法中產(chǎn)生的變性DNA，增加超螺旋DNA比例，提高DNA克隆和轉(zhuǎn)染效率。-降解質(zhì)粒樣品中污染的線性化和切刻DNA。6.**操作條件**：推薦在37℃溫育30分鐘，之后加入EDTA至終濃度為20mM終止反應(yīng)。7.**儲(chǔ)存條件**：-25～-15℃保存，有效期3年。8.**注意事項(xiàng)**：避免起泡或劇烈攪拌、渦旋等操作，以防止本品失活。這些特點(diǎn)和技術(shù)應(yīng)用使得T5核酸外切酶在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，尤其是在DNA克隆和基因片段組裝中，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。Pfu DNA Polymerase在分子進(jìn)化研究中的應(yīng)用：Pfu DNA Polymerase用于分子進(jìn)化研究，確保DNA序列的準(zhǔn)確復(fù)制。Recombinant Mouse CCL4/MIP-1 beta Protein

Endo H 是一種糖蛋白特異性的酶，主要作用于含有 N - 連接寡糖鏈的糖蛋白，對(duì)其他類型的生物大分子如核酸。Recombinant Mouse CXCL13/BCA-1 Protein,hFc Tag

在DNA提取過程中避免RNA污染的關(guān)鍵在于采取一系列措施來確保RNA被有效去除或降解，同時(shí)保護(hù)DNA的完整性和純度。以下是一些確保DNA提取過程中避免RNA污染的策略：1.**使用專門的DNA提取試劑盒**：選擇高質(zhì)量的DNA提取試劑盒，這些試劑盒通常已經(jīng)包含了防止RNA污染的措施，如特定的裂解液和純化步驟，能夠有效去除RNA。2.**加入RNA酶（RNase）處理**：在DNA提取過程中加入RNase處理步驟，可以有效地去除殘留的RNA污染。RNase是一種能夠特異性降解RNA的酶，可以在不影響DNA完整性的前提下去除RNA污染。3.**優(yōu)化實(shí)驗(yàn)操作步驟**：在破碎細(xì)胞時(shí)，選擇合適的破碎方法和破碎時(shí)間，避免過度破碎導(dǎo)致RNA的釋放；在DNA純化階段，控制好離心速度和時(shí)間，避免RNA的沉淀。4.**使用無RNase的試劑和耗材**：使用經(jīng)過RNase-free處理的實(shí)驗(yàn)器材和試劑，確保實(shí)驗(yàn)過程中不會(huì)引入外源性RNA污染。5.**嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)環(huán)境**：保持實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面和工作區(qū)域干凈無塵，定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行消殺，避免RNA酶污染。6.**個(gè)人防護(hù)和操作規(guī)范**：在處理DNA樣品時(shí)，佩戴無菌手套和口罩，以減少呼吸道和皮膚污染的風(fēng)險(xiǎn)。使用不同的工具處理不同的樣品，或者在處理前后徹底清洗工具，避免交叉污染。Recombinant Mouse CXCL13/BCA-1 Protein,hFc Tag